人14-3-3γ基因的腺病毒载体的构建及其在PC12细胞中的表达-神经解剖学杂志

人14-3-3γ基因的腺病毒载体的构建及其在PC12细胞中的表达

作者：陈小武[1] 陈志斌[1] 王埮[1] 袁昆雄[1] 王淑荣[1] 孙圣刚[2]

单位：海南医学院附属医院神经内科,海口,570102华中科技大学附属协和医院神经内科,武汉,430022

分类号：R3

出版年·卷·期（页码）：2011·27·第一期（1-1）

摘要：

目的:构建携带人14-3-3 γ基因的重组腺病毒表达载体并确定其对PC12细胞的感染效率.方法:采用PCR方法,从Top10/pHis-14-3-3 γ质粒中扩增14-3-3 γ DNA序列,将14-3-3 γ基因定向克隆到穿梭质粒载体pAdTrack-CMV,经与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1载体同源重组后得到携带人14-3-3γ基因的重组腺病毒(pAd/14-3-3 γ),采用PCR的方法对重组腺病毒进行鉴定,转染HEK293细胞进行包装和扩增,氯化铯密度梯度离心法纯化,半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infective dose,TCID50)方法测定重组腺病毒的滴度.体外感染PC12细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)和Western Blot检测14-3-3γ蛋白的表达.结果:克隆得到人14-3-3γ基因,经PCR鉴定和测序证实结果正确,成功构建得到高滴度的重组腺病毒,并能高效感染PC12细胞.结论:本实验成功构建了表达14-3-3 γ的复制缺陷型重组腺病毒Ad-14-3-3,为用14-3-3 γ基因治疗帕金森病奠定了基础.

参考文献：

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